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सवाल :Plasmid k upyog
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[आगंतुक (183.193.*.*)]जवाब [चीनी ]समय :2021-12-21
pBR322 की संरचना और इसकी निर्माण प्रक्रिया को समझने के बाद, आइए जेनेटिक इंजीनियरिंग में pBR322 के आवेदन को देखें।

आमतौर पर इस्तेमाल होने वाले जीन क्लोनिंग वेक्टर के रूप में, pBR322 प्लाज्मिड का व्यावहारिक अनुप्रयोगों में एक बहुत महत्वपूर्ण स्थान है, और प्रमुख उदाहरणों में से एक चावल के क्लोरोप्लास्ट फोटो-निष्क्रिय जीन पीएसबीए के संरचनात्मक विश्लेषण के लिए क्लोनिंग वेक्टर के रूप में pBR322 का उपयोग है।
चावल क्लोरोप्लास्ट का डीएनए इकोरी न्यूक्लिक एसिड प्रतिबंध एंडोक्यूक्लिज के साथ पचा गया था और इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा 1% एगरेज जेल में अलग किया गया था जिसमें एथिडियम ब्रोमाइड (एलएमपी) होता है। आणविक आकार में 1.8 और 2.5 किलो के बीच डीएनए के टुकड़ों को एलएमपी से अलग किया गया था और फिर पीबीआर 322 प्लाज्मिड से जोड़ा गया था जिसे इकोरी न्यूक्लिक एसिड प्रतिबंध एंजाइम द्वारा भी कटा हुआ था और क्षारीय फॉस्फेट के साथ डीफोस्फोरिलेटेड किया गया था। मिश्रण तो एक ई. कोलाई ५३४६ तनाव में तब्दील हो जाता है, एम्पीसिलिन चयन प्लेटों पर सुसंस्कृत, ampr कॉलोनी आबादी को बदलने के रूप में.यह इकोरी न्यूक्लिक एसिड प्रतिबंध एंजाइमों द्वारा एक चावल क्लोरोप्लास्ट डीएनए जीनोम बैंक का गठन करता है। कालोनियों को 32P रेडियोलेबल मक्का पीएसबीए डीएनए जांच के साथ एम्पर ट्रांसफॉर्मेंट कॉलोनियों के साथ संकरित किया गया था, और सकारात्मक क्लोन अलग-थलग किया जा सकता है। चावल क्लोरोप्लास्ट जीन पीएसबीए के अनुक्रम को निर्धारित करने के लिए इन सकारात्मक क्लोनों से अलग किए गए पुनर्संयोजन प्लाज्मिड डीएनए का और विश्लेषण किया गया ।..
मनुष्यों में विकास अवरोध हार्मोन को फिर से संलैना करने के लिए वाहक के रूप में pBR322 का उपयोग भी अक्सर उल्लिखित आवेदन का एक उदाहरण है। यह प्रक्रिया चावल क्लोरोप्लास्ट जीन पुनर्संयोजन के समान है, सिवाय इसके कि प्लाज्मिड वेक्टर पर विकास अवरोध हार्मोन जीन डालने के अलावा, लाख ऑपरन के शुरुआती हिस्से (प्रमोटरों, हेरफेर क्षेत्रों, राइबोसोम बाध्यकारी साइटों सहित, और β-गैलेक्टोसिडास का मुख्य हिस्सा) विकास अवरोध हार्मोन जीन के बगल में डाले जाते हैं। लाख ऑपरन के नियंत्रण के लिए धन्यवाद, रिकॉम्बिनेंट जीन द्वारा उत्पादित प्रोटीन का विनियमन अपेक्षाकृत आसान हो जाता है।
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